大孔樹脂的預處理
將新大孔樹脂于95% 乙醇溶液中浸洗8 h 后, 用蒸餾水清洗至無醇味, 再用5% 氫氧化鈉浸泡4 h, 用蒸餾水洗至pH 值中性后, 接著用5% 鹽酸浸泡4 h, 再用蒸餾水洗至pH 中性。濕法裝柱, 一次完成, 自然沉降。
大孔樹脂堆積密度的測定
取一標準玻璃層析柱(26 mm ×500 mm ) 將濕大孔樹脂堆至100 mL , 取出, 稱重。按下式計算大孔樹脂的堆積密度:
Q= m/v
式中 m —— 濕樹脂質(zhì)量, g; v —— 樹脂體積,mL ;Q—— 堆積密度, g/mL。
飽和吸附量的測定
稱取1. 000 g 濕樹脂于錐形瓶中, 加入50 mL 0. 8mg/m L 的羅漢果皂甙水提取物, 封口, 于室溫下震蕩吸附24 h。分別于吸附前后測定溶液中羅漢果皂甙的濃度, 按下式計算飽和吸附量:
Q 0 = (C0 - C1) ×V/W
式中 Q 0—— 飽和吸附量,mg/g; C0—— 吸附前濃度,mgömL ; C1—— 吸附后濃度,mg/mL ; V —— 溶液體積,mL ; W —— 大孔樹脂濕重, g。
羅漢果皂甙靜態(tài)吸附試驗
稱取1. 000 g 濕大孔樹脂置于錐形瓶中, 加入50mL 0. 8 m gömL 的羅漢果皂甙水提取物, 封口, 每隔20m in 從上清液中取樣0. 5 mL , 測定其吸光度, 然后按下式計算吸附量:
Q = (C0 - C1) ×V/W
以吸附量為縱坐標, 作用時間為橫坐標繪制靜態(tài)吸附曲線。
羅漢果皂甙靜態(tài)解吸試驗
稱取0. 500 g 濕大孔樹脂3 份, 各加入15 mL 0. 8m gömL 的羅漢果皂甙提取物水溶液, 于室溫下吸附24h 后, 將充分吸附了羅漢果皂甙水溶液的樹脂進行過濾, 去除水液, 再將其置于錐形瓶中, 各加入15mL 95%乙醇溶液, 封口, 分別于20℃, 40℃, 60℃下進行解吸, 每隔3 m in 測定解吸液中羅漢果皂甙的濃度, 并繪制解吸曲線, 同時根據(jù)吸附量計算解吸率。
羅漢果皂甙的動態(tài)吸附試驗
準確吸取20 mL (約17. 93 g)D101 大孔樹脂裝柱,以濃度為4 m göm L 的羅漢果皂甙水提取物溶液上柱,流速2 mL /m in, 分部收集流出液, 定時測定流出液中的羅漢果皂甙濃度, 然后以洗脫液體積為橫坐標, 流出液中羅漢果皂甙含量為縱坐標繪制動態(tài)吸附曲線。吸附達到飽和后, 計算飽和動態(tài)吸附量。
洗脫劑及其濃度的選擇
取一定量的羅漢果皂甙提取物水溶液, 上柱, 先用蒸餾水洗脫至無色后, 依次用50mL 10%～ 80% 濃度的乙醇溶液進行洗脫, 收集不同濃度的乙醇洗脫液并定容至50 mL , 取其中3 mL 洗脫液稀釋至10 mL 后測定其羅漢果皂甙的濃度, 以確定的洗脫劑濃度。
上樣液最適pH 值的選擇
將羅漢果皂甙水提物溶液(pH 值6. 0) 用氫氧化鈉溶液調(diào)至不同的pH 值, 上柱, 依次用50 mL 同樣pH 值的水溶液, 蒸餾水及60% 的乙醇水溶液進行洗脫, 收集60% 的乙醇洗脫液(pH 值6.0) , 定容至50mL , 取3mL洗脫液稀釋至10 mL , 測定羅漢果皂甙的濃度, 確定其pH 值。
羅漢果皂甙V , 11-O -羅漢果皂甙V 及羅漢果皂甙IV 的高效液相分析
對照品溶液的配制: 準確稱取羅漢果皂甙V , 11-O-羅漢果皂甙V 及羅漢果皂甙IV 對照品0. 005 g, 用23%乙腈水溶液溶解并定容至10 mL , 配制成混合對照品溶液。
樣品溶液的配制: 準確稱取各樣品0. 010 g, 用23%乙腈溶解并定容至10mL , 配制成1. 0m göm L 的樣品溶液。
色譜條件: Hypersil ODS C18 柱(250 mm ×4. 6mm , 5μm, 大連伊利特科學儀器公司) ; 流動相: 乙腈:水= 23∶77 (v/v) ; 流速: 0. 5 mL /m in; 柱溫: 30℃; 檢測波長: 210 nm; 進樣量: 10. 0μL。以保留時間定性, 根據(jù)峰面積計算樣品的含量。
將新大孔樹脂于95% 乙醇溶液中浸洗8 h 后, 用蒸餾水清洗至無醇味, 再用5% 氫氧化鈉浸泡4 h, 用蒸餾水洗至pH 值中性后, 接著用5% 鹽酸浸泡4 h, 再用蒸餾水洗至pH 中性。濕法裝柱, 一次完成, 自然沉降。
大孔樹脂堆積密度的測定
取一標準玻璃層析柱(26 mm ×500 mm ) 將濕大孔樹脂堆至100 mL , 取出, 稱重。按下式計算大孔樹脂的堆積密度:
Q= m/v
式中 m —— 濕樹脂質(zhì)量, g; v —— 樹脂體積,mL ;Q—— 堆積密度, g/mL。
飽和吸附量的測定
稱取1. 000 g 濕樹脂于錐形瓶中, 加入50 mL 0. 8mg/m L 的羅漢果皂甙水提取物, 封口, 于室溫下震蕩吸附24 h。分別于吸附前后測定溶液中羅漢果皂甙的濃度, 按下式計算飽和吸附量:
Q 0 = (C0 - C1) ×V/W
式中 Q 0—— 飽和吸附量,mg/g; C0—— 吸附前濃度,mgömL ; C1—— 吸附后濃度,mg/mL ; V —— 溶液體積,mL ; W —— 大孔樹脂濕重, g。
羅漢果皂甙靜態(tài)吸附試驗
稱取1. 000 g 濕大孔樹脂置于錐形瓶中, 加入50mL 0. 8 m gömL 的羅漢果皂甙水提取物, 封口, 每隔20m in 從上清液中取樣0. 5 mL , 測定其吸光度, 然后按下式計算吸附量:
Q = (C0 - C1) ×V/W
以吸附量為縱坐標, 作用時間為橫坐標繪制靜態(tài)吸附曲線。
羅漢果皂甙靜態(tài)解吸試驗
稱取0. 500 g 濕大孔樹脂3 份, 各加入15 mL 0. 8m gömL 的羅漢果皂甙提取物水溶液, 于室溫下吸附24h 后, 將充分吸附了羅漢果皂甙水溶液的樹脂進行過濾, 去除水液, 再將其置于錐形瓶中, 各加入15mL 95%乙醇溶液, 封口, 分別于20℃, 40℃, 60℃下進行解吸, 每隔3 m in 測定解吸液中羅漢果皂甙的濃度, 并繪制解吸曲線, 同時根據(jù)吸附量計算解吸率。
羅漢果皂甙的動態(tài)吸附試驗
準確吸取20 mL (約17. 93 g)D101 大孔樹脂裝柱,以濃度為4 m göm L 的羅漢果皂甙水提取物溶液上柱,流速2 mL /m in, 分部收集流出液, 定時測定流出液中的羅漢果皂甙濃度, 然后以洗脫液體積為橫坐標, 流出液中羅漢果皂甙含量為縱坐標繪制動態(tài)吸附曲線。吸附達到飽和后, 計算飽和動態(tài)吸附量。
洗脫劑及其濃度的選擇
取一定量的羅漢果皂甙提取物水溶液, 上柱, 先用蒸餾水洗脫至無色后, 依次用50mL 10%～ 80% 濃度的乙醇溶液進行洗脫, 收集不同濃度的乙醇洗脫液并定容至50 mL , 取其中3 mL 洗脫液稀釋至10 mL 后測定其羅漢果皂甙的濃度, 以確定的洗脫劑濃度。
上樣液最適pH 值的選擇
將羅漢果皂甙水提物溶液(pH 值6. 0) 用氫氧化鈉溶液調(diào)至不同的pH 值, 上柱, 依次用50 mL 同樣pH 值的水溶液, 蒸餾水及60% 的乙醇水溶液進行洗脫, 收集60% 的乙醇洗脫液(pH 值6.0) , 定容至50mL , 取3mL洗脫液稀釋至10 mL , 測定羅漢果皂甙的濃度, 確定其pH 值。
羅漢果皂甙V , 11-O -羅漢果皂甙V 及羅漢果皂甙IV 的高效液相分析
對照品溶液的配制: 準確稱取羅漢果皂甙V , 11-O-羅漢果皂甙V 及羅漢果皂甙IV 對照品0. 005 g, 用23%乙腈水溶液溶解并定容至10 mL , 配制成混合對照品溶液。
樣品溶液的配制: 準確稱取各樣品0. 010 g, 用23%乙腈溶解并定容至10mL , 配制成1. 0m göm L 的樣品溶液。
色譜條件: Hypersil ODS C18 柱(250 mm ×4. 6mm , 5μm, 大連伊利特科學儀器公司) ; 流動相: 乙腈:水= 23∶77 (v/v) ; 流速: 0. 5 mL /m in; 柱溫: 30℃; 檢測波長: 210 nm; 進樣量: 10. 0μL。以保留時間定性, 根據(jù)峰面積計算樣品的含量。