在血栓與止血檢驗(yàn)的全過程中,實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)受到諸多因素的影響。質(zhì)量控制是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的重要措施。當(dāng)實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)意想不到的結(jié)果時(shí),應(yīng)從各方面尋找原因,最后找到問題所在,通過改進(jìn)措施,得到一個(gè)準(zhǔn)確的結(jié)果。
一、受檢狀態(tài)的影響:
受檢者的狀態(tài),如被測者生理變化、飲食改變、環(huán)境因素、服用藥物等引起變化,在采集血標(biāo)本時(shí)若未注意到這些因素也會(huì)對(duì)結(jié)果做出錯(cuò)誤判斷。
不同的藥物和某些生理狀況(如懷孕、情緒激動(dòng)、劇烈運(yùn)動(dòng))會(huì)對(duì)一些凝血結(jié)果造成影響。阿斯匹林、潘生丁和抵克利德等藥物能抑制血小板聚集,肝素和口服抗凝劑能抑制凝血機(jī)能。尿激酶(UK)和鏈激酶(SK)等可進(jìn)促纖溶功能。口服避孕藥會(huì)使血小板粘附功能、血小板聚集功能、纖維蛋白原、凝血酶原以及凝血因子Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅻ因子活性明顯升高。劇烈運(yùn)動(dòng)和月經(jīng)期纖溶活性明顯升高,高脂肪食物造成血脂升高可抑制纖溶活性。吸煙可使血小板聚集性明顯升高。飲酒可抑制血小板聚集性。劇烈運(yùn)動(dòng)或輸注腎上腺素時(shí),Ⅷ因子活性會(huì)快速上升。
因此,當(dāng)出現(xiàn)一些意想不到的結(jié)果時(shí),應(yīng)考慮是否有以上因素的影響。
二、標(biāo)本的采集:
1.確認(rèn)病人的姓名,采血管上應(yīng)注明病人的姓名,同檢驗(yàn)申請單核對(duì),避免張冠李帶。
2.受檢者必須在休息狀態(tài)下,并且在早餐前采血,對(duì)于觀察療效和預(yù)防臨床出血病人的監(jiān)測在同一條件下采血。
3.采集血液必須用塑料或硅化的玻璃注射器,避免凝血因子激活,使用雙筒注射器采血,禁用血?dú)庥玫淖⑸淦鳌?BR> 4.針頭必須采用21號(hào)(外徑0.8mm)以上,兒童可用23號(hào)。
5.止血帶不應(yīng)扎得過緊,不要超過5分鐘。
6.采血人員應(yīng)技術(shù)熟練,“一針見血”,以防組織損傷,由于外源性凝血因子進(jìn)入針管,會(huì)使凝血因子激活,可造成PT和APTT時(shí)間縮短。取血時(shí),拉針的速度要慢并且均勻,使血液平穩(wěn)地進(jìn)入注射器,防止氣泡產(chǎn)生。泡沫的產(chǎn)生可使纖維蛋白原,因子V和因子Ⅶ變性。
7.迅速將血液與抗凝劑輕輕的顛倒混勻,避免用力振蕩而破壞凝血蛋白。
8.采集后的血液應(yīng)放在加塞子的試管內(nèi),因?yàn)槲醇尤拥脑嚬軙?huì)使血液中的CO2丟失,PH升高,使PT和APTT時(shí)間延長。
9.分離血漿時(shí)用塑料吸頭移取,并盛放在塑料管內(nèi)。因玻璃表面能激活凝血過程,從而使凝血時(shí)間縮短。
總之,實(shí)驗(yàn)人員采血,因?yàn)樗麄冎啦裳淖⒁馐马?xiàng),也能盡量縮短采血后至實(shí)驗(yàn)前標(biāo)本放置的時(shí)間。
三、標(biāo)本的制備:
1.采血之后血液在室溫放置時(shí)間不能超過2小時(shí)。
2.全血貯存在4-10℃不超過2小時(shí),在1小時(shí)內(nèi)分離血漿,-20℃可保存2周,-80℃可保存18個(gè)月,冷凍血漿中的凝血因子在越低溫度下越穩(wěn)定。
3.如果檢測冷凍血漿,必須在37℃水浴中快速溶解,冷凍過的血漿不能再次冷凍。冷凍血漿融化時(shí),不能在室溫中讓其自然融化,這樣會(huì)使纖維蛋白原析出和凝血因子消耗。
4.溶血標(biāo)本可造成PT和APTT輕微縮短。
5.血漿制備,血樣應(yīng)在2000-2500g離心10-15分鐘。
四、抗凝劑
1.標(biāo)本應(yīng)采集在含有枸櫞酸鈉(109mmol/L)抗凝劑的試管內(nèi),抗凝劑與血的比例應(yīng)為1:9,混勻要充分。
2.應(yīng)準(zhǔn)確把握抗凝劑的濃度。即Na3C6H5O7.2H2O為3.2%,Na3C6H5O7.5H2O為3.8%。
3.當(dāng)Hct>0.55或Hct<0.25時(shí),務(wù)必用MacGann推薦的公式計(jì)算抗凝劑的用量,抗凝劑的用量(ml)=0.00185×全血量(ml)×〔1-Hct(%)〕,否則結(jié)果不可信,Hct低可使PT和APTT凝固時(shí)間縮短,Hct高可使PT和APTT凝固時(shí)間延長。
4.如果自配抗凝劑,枸櫞酸鈉應(yīng)為基準(zhǔn)試劑或分析純試劑。
5.抗凝劑+抗聚劑:通常選用CTAD液,成份:枸櫞酸鈉0.11mol/L,茶堿15mmol/L,腺苷3.7mmol/L,潘生丁0.198mmo1/L.優(yōu)點(diǎn):采血后血小板很少活化,且保存時(shí)間可超過15小時(shí)。
6.抗凝劑+抗纖溶劑:在溶栓治療的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測中,若用常用抗凝劑會(huì)使纖溶系統(tǒng)持續(xù)激活,可使纖維蛋白原及其降解產(chǎn)物(FDP)的定量比現(xiàn)差異。應(yīng)該使用“抗凝劑十抗纖溶劑”的抗凝劑,抗纖溶劑可選用抑肽酶,它可以抑制激肽釋放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶、凝血因子和纖溶活性,能精確測定纖維蛋白原,但會(huì)引起凝血酶時(shí)間的延長。
五、試劑
1.蒸餾水:使用重蒸水比用去離子水好,蒸餾水的PH為6.0-7.0.水質(zhì)不能有混濁,應(yīng)無菌,無Ca2+、無致熱源。
2.有保護(hù)劑、抗生素、抗體或其它添加劑的水不能用于溶劑試劑。
3.復(fù)溶后的試劑,不用時(shí)應(yīng)加蓋子,儲(chǔ)存在2-8℃,APTT和FIB均不要冷凍保存。冬天運(yùn)輸時(shí),注意防凍。
4.稀釋倍數(shù)要準(zhǔn)確,并標(biāo)明復(fù)溶或開瓶時(shí)間。復(fù)溶后在冰箱中貯存時(shí)間不能過長,國產(chǎn)試劑最長7天,復(fù)溶試劑需用幾天的,不應(yīng)在預(yù)溫槽中放置時(shí)\0
一、受檢狀態(tài)的影響:
受檢者的狀態(tài),如被測者生理變化、飲食改變、環(huán)境因素、服用藥物等引起變化,在采集血標(biāo)本時(shí)若未注意到這些因素也會(huì)對(duì)結(jié)果做出錯(cuò)誤判斷。
不同的藥物和某些生理狀況(如懷孕、情緒激動(dòng)、劇烈運(yùn)動(dòng))會(huì)對(duì)一些凝血結(jié)果造成影響。阿斯匹林、潘生丁和抵克利德等藥物能抑制血小板聚集,肝素和口服抗凝劑能抑制凝血機(jī)能。尿激酶(UK)和鏈激酶(SK)等可進(jìn)促纖溶功能。口服避孕藥會(huì)使血小板粘附功能、血小板聚集功能、纖維蛋白原、凝血酶原以及凝血因子Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅻ因子活性明顯升高。劇烈運(yùn)動(dòng)和月經(jīng)期纖溶活性明顯升高,高脂肪食物造成血脂升高可抑制纖溶活性。吸煙可使血小板聚集性明顯升高。飲酒可抑制血小板聚集性。劇烈運(yùn)動(dòng)或輸注腎上腺素時(shí),Ⅷ因子活性會(huì)快速上升。
因此,當(dāng)出現(xiàn)一些意想不到的結(jié)果時(shí),應(yīng)考慮是否有以上因素的影響。
二、標(biāo)本的采集:
1.確認(rèn)病人的姓名,采血管上應(yīng)注明病人的姓名,同檢驗(yàn)申請單核對(duì),避免張冠李帶。
2.受檢者必須在休息狀態(tài)下,并且在早餐前采血,對(duì)于觀察療效和預(yù)防臨床出血病人的監(jiān)測在同一條件下采血。
3.采集血液必須用塑料或硅化的玻璃注射器,避免凝血因子激活,使用雙筒注射器采血,禁用血?dú)庥玫淖⑸淦鳌?BR> 4.針頭必須采用21號(hào)(外徑0.8mm)以上,兒童可用23號(hào)。
5.止血帶不應(yīng)扎得過緊,不要超過5分鐘。
6.采血人員應(yīng)技術(shù)熟練,“一針見血”,以防組織損傷,由于外源性凝血因子進(jìn)入針管,會(huì)使凝血因子激活,可造成PT和APTT時(shí)間縮短。取血時(shí),拉針的速度要慢并且均勻,使血液平穩(wěn)地進(jìn)入注射器,防止氣泡產(chǎn)生。泡沫的產(chǎn)生可使纖維蛋白原,因子V和因子Ⅶ變性。
7.迅速將血液與抗凝劑輕輕的顛倒混勻,避免用力振蕩而破壞凝血蛋白。
8.采集后的血液應(yīng)放在加塞子的試管內(nèi),因?yàn)槲醇尤拥脑嚬軙?huì)使血液中的CO2丟失,PH升高,使PT和APTT時(shí)間延長。
9.分離血漿時(shí)用塑料吸頭移取,并盛放在塑料管內(nèi)。因玻璃表面能激活凝血過程,從而使凝血時(shí)間縮短。
總之,實(shí)驗(yàn)人員采血,因?yàn)樗麄冎啦裳淖⒁馐马?xiàng),也能盡量縮短采血后至實(shí)驗(yàn)前標(biāo)本放置的時(shí)間。
三、標(biāo)本的制備:
1.采血之后血液在室溫放置時(shí)間不能超過2小時(shí)。
2.全血貯存在4-10℃不超過2小時(shí),在1小時(shí)內(nèi)分離血漿,-20℃可保存2周,-80℃可保存18個(gè)月,冷凍血漿中的凝血因子在越低溫度下越穩(wěn)定。
3.如果檢測冷凍血漿,必須在37℃水浴中快速溶解,冷凍過的血漿不能再次冷凍。冷凍血漿融化時(shí),不能在室溫中讓其自然融化,這樣會(huì)使纖維蛋白原析出和凝血因子消耗。
4.溶血標(biāo)本可造成PT和APTT輕微縮短。
5.血漿制備,血樣應(yīng)在2000-2500g離心10-15分鐘。
四、抗凝劑
1.標(biāo)本應(yīng)采集在含有枸櫞酸鈉(109mmol/L)抗凝劑的試管內(nèi),抗凝劑與血的比例應(yīng)為1:9,混勻要充分。
2.應(yīng)準(zhǔn)確把握抗凝劑的濃度。即Na3C6H5O7.2H2O為3.2%,Na3C6H5O7.5H2O為3.8%。
3.當(dāng)Hct>0.55或Hct<0.25時(shí),務(wù)必用MacGann推薦的公式計(jì)算抗凝劑的用量,抗凝劑的用量(ml)=0.00185×全血量(ml)×〔1-Hct(%)〕,否則結(jié)果不可信,Hct低可使PT和APTT凝固時(shí)間縮短,Hct高可使PT和APTT凝固時(shí)間延長。
4.如果自配抗凝劑,枸櫞酸鈉應(yīng)為基準(zhǔn)試劑或分析純試劑。
5.抗凝劑+抗聚劑:通常選用CTAD液,成份:枸櫞酸鈉0.11mol/L,茶堿15mmol/L,腺苷3.7mmol/L,潘生丁0.198mmo1/L.優(yōu)點(diǎn):采血后血小板很少活化,且保存時(shí)間可超過15小時(shí)。
6.抗凝劑+抗纖溶劑:在溶栓治療的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測中,若用常用抗凝劑會(huì)使纖溶系統(tǒng)持續(xù)激活,可使纖維蛋白原及其降解產(chǎn)物(FDP)的定量比現(xiàn)差異。應(yīng)該使用“抗凝劑十抗纖溶劑”的抗凝劑,抗纖溶劑可選用抑肽酶,它可以抑制激肽釋放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶、凝血因子和纖溶活性,能精確測定纖維蛋白原,但會(huì)引起凝血酶時(shí)間的延長。
五、試劑
1.蒸餾水:使用重蒸水比用去離子水好,蒸餾水的PH為6.0-7.0.水質(zhì)不能有混濁,應(yīng)無菌,無Ca2+、無致熱源。
2.有保護(hù)劑、抗生素、抗體或其它添加劑的水不能用于溶劑試劑。
3.復(fù)溶后的試劑,不用時(shí)應(yīng)加蓋子,儲(chǔ)存在2-8℃,APTT和FIB均不要冷凍保存。冬天運(yùn)輸時(shí),注意防凍。
4.稀釋倍數(shù)要準(zhǔn)確,并標(biāo)明復(fù)溶或開瓶時(shí)間。復(fù)溶后在冰箱中貯存時(shí)間不能過長,國產(chǎn)試劑最長7天,復(fù)溶試劑需用幾天的,不應(yīng)在預(yù)溫槽中放置時(shí)\0