第十二章 雜環(huán)類藥物的分析
第一節(jié) 異煙肼的分析
本類藥物母核吡啶環(huán)上的氮原子為堿性氮原子，吡啶環(huán)γ位上被酰肼取代，酰肼基具有較強(qiáng)的還原性，并可與某些含羰基的試劑發(fā)生縮合反應(yīng)。
一、鑒別試驗(yàn)
1.制備衍生物測定熔點(diǎn)
酰肼基與芳醛縮合形成腙，析出結(jié)晶，可測定其熔點(diǎn)。最常用的芳醛為香草醛。
2.銀鏡反應(yīng) 取異煙肼約10mg，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1ml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。
3.紅外光譜
二、異煙肼中游離肼的檢查
異煙肼是一種不穩(wěn)定的藥物，其中的游離肼是由制備時(shí)原料引入，或在貯存過程中降解而產(chǎn)生。而肼又是一種誘變劑和致癌物質(zhì)，因此國內(nèi)外藥典多數(shù)規(guī)定了異煙肼原料藥及其制劑中游離肼的限量檢查。中國藥典對(duì)異煙肼原料和注射用異煙肼中游離肼的檢查均采用薄層色譜法。
檢查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg(相當(dāng)于游離肼50μg)的溶液，作為對(duì)照溶液。吸取供試液10μl 與對(duì)照溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板(用羧甲基纖維素鈉溶液制備)上，以異丙醇-丙酮(3:2)為展開劑，展開后，晾干，噴以乙醇制對(duì)二甲氨基苯甲醛試液，15min后檢視，在供試品主斑點(diǎn)前方與硫酸肼斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點(diǎn)。
異煙肼斑點(diǎn)呈棕橙色的清晰斑點(diǎn)，Rf值約為0.21。游離肼斑點(diǎn)呈鮮黃色，Rf值約為0.3。本法檢出肼的靈敏度為0.1μg，檢出限量約為0.02%。
三、含量測定
異煙肼具有還原性，可用氧化還原滴定法測定含量。中國藥典采用溴酸鉀法，用甲基橙指示劑指示終點(diǎn);等當(dāng)點(diǎn)過后稍過量的溴酸鉀氧化甲基橙使其粉紅色消失。采用本法測定異煙肼片和注射劑的含量。
第二節(jié) 硝苯地平的分析
具有1,4-二氫吡啶母核。苯環(huán)上硝基取代，遇光不穩(wěn)定，易發(fā)生自身氧化還原反應(yīng)。
一、鑒別
1.與NaOH試液反應(yīng)：加20%NaOH溶液，振搖顯橙紅色
2.紫外分光光度法
3.紅外分光光度法
二、檢查
1.有關(guān)物質(zhì)：易發(fā)生光化學(xué)岐化反應(yīng)，降解為硝苯吡啶衍生物及亞硝苯吡啶衍生物。采用HPLC檢查，限量分別為0.2%，雜質(zhì)總量不得大于0.5%。檢查時(shí)避光操作。
2.一般雜質(zhì)
三、含量測定
硝苯地平具有還原性，可在酸性溶液中用鈰量法直接滴定，以鄰二氮菲為指示劑。
第三節(jié) 諾氟沙星及其制劑的分析
一、諾氟沙星的分析
(一)鑒別
1.薄層色譜：對(duì)照品對(duì)照
2.HPLC
(二)檢查
有關(guān)物質(zhì)：HPLC，自身稀釋對(duì)照
(三)含量測定
HPLC，外標(biāo)法計(jì)算。流動(dòng)相中加入適量三乙胺掃尾劑，可克服拖尾現(xiàn)象。
二、諾氟沙星制劑
1.軟膏和乳膏劑：紫外分光光度法，對(duì)照品比較法
軟膏基質(zhì)干擾測定，利用其溶于三氯甲烷，藥物有羧基溶于NaOH的性質(zhì)進(jìn)行處理。加三氯甲烷溶解供試品后，用NaOH溶液提取藥物進(jìn)行測定。
2.膠囊：紫外分光光度法檢查溶出度，HPLC測定含量
第四節(jié) 鹽酸氯丙嗪和奮乃靜的分析
分子結(jié)構(gòu)中具有共同的硫氮雜蒽母核，10位上的取代基，為具有2-3個(gè)碳鏈的二甲或二乙胺基，或?yàn)楹s環(huán)如哌嗪的衍生物等。具有紫外特征吸收，峰多在250nm～265nm。遇不同氧化劑例如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過氧化氫等，易被氧化呈色。
一、鑒別
(一)鹽酸氯丙嗪的鑒別
1.氧化反應(yīng)
吩噻嗪環(huán)可被不同氧化劑如硫酸、硝酸氧化而呈色。如加硝酸5滴顯紅色，漸變?yōu)辄S色。
2.紫外吸收光譜
氯丙嗪在254nm和306nm有吸收，在254nm吸收度約為0.46。
3.Cl-反應(yīng)
沉淀反應(yīng) 與硝酸銀生成白色沉淀，可溶于氨試液
氧化反應(yīng) 與二氧化錳硫酸反應(yīng)產(chǎn)生氯氣，使?jié)駶櫟矸鄣饣浽嚰堊兯{(lán)。
4.紅外光譜
(二)奮乃靜的鑒別
1.氧化反應(yīng) 被過氧化氫氧化呈深紅色
2紫外吸收光譜
奮乃靜在258nm8有吸收，吸收度約為0.65。
3.紅外光譜法
二、有關(guān)物質(zhì)檢查
(一)溶液澄清度和顏色
澄清度 控制游離氯丙嗪
顏色 控制氧化產(chǎn)物的量
(二)有關(guān)物質(zhì)
控制合成的原料氯吩噻嗪和間氯苯胺等。采用薄層色譜法自身稀釋對(duì)照法檢查。限量1.0%。
奮乃靜采用薄層色譜法自身稀釋對(duì)照法檢查，規(guī)定限量3.0%
三、鹽酸氯丙嗪及其制劑的含量測定
(一)鹽酸氯丙嗪
1.原料藥 非水溶液滴定法
側(cè)鏈脂氨基具有堿性。由于為鹽酸鹽，滴定前加入一定量的醋酸汞試液，使生成難離解的氯化汞，在進(jìn)行滴定
2.片劑 紫外分光光度法
在波長254nm測定吸收度，按吸收系數(shù)法測定標(biāo)示量百分含量。
3.注射劑 紫外分光光度法
維生素C在243nm有吸收，為防止抗氧劑維生素C干擾，在306nm波長處測定。
四、奮乃靜及其制劑的含量測定
1.原料藥 非水滴定法
2.片劑 紫外分光光度法，對(duì)照品比較法計(jì)算含量
3.注射劑 萃取后非水滴定法
由于溶劑水對(duì)測定有干擾，所以加氫氧化鈉試液堿化后，用氯仿提取藥物，揮干氯仿，照原料藥方法測定。
第五節(jié) 地西泮和奧沙西泮及其制劑的分析
二氮雜卓七元環(huán)上氮原子具有強(qiáng)的堿性，具有明顯紫外吸收。
一、鑒別
(一) 地西泮
1.硫酸-熒光反應(yīng) 藥物溶于硫酸后，在紫外光(365nm)下，呈現(xiàn)黃綠色熒光。
2. 紫外和紅外吸收光譜
3. 氯元素反應(yīng) 本藥物為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，生成氯化氫，以5%氫氧化鈉溶液吸收，加硝酸酸化，顯氯化物反應(yīng)。
(二) 奧沙西泮
1.水解后重氮化-偶合反應(yīng) 鹽酸酸性條件下，緩緩加熱煮沸，水解生成二苯甲酮衍生物，具有芳伯氨基。加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅沉淀。
2.紫外光譜和紅外光譜
二、有關(guān)物質(zhì)檢查
1.地西泮：在生產(chǎn)工藝過程或貯藏期間出現(xiàn)分解，產(chǎn)生2-甲氨基-5-氯二苯酮雜質(zhì)。用HPLC，不加校正因子的主成分自身對(duì)照法檢查雜質(zhì)。
2.奧沙西泮：薄層色譜，溶液自身稀釋對(duì)照法
三、含量測定
1.地西泮：二氮雜卓七元雜環(huán)上氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法測定其含量
2.奧沙西泮：紫外分光光度法
四、地西泮制劑分析
(一)片劑
1.檢查
有關(guān)物質(zhì)：薄層色譜，溶液自身稀釋對(duì)照法，限量0.5%
含量均勻度：紫外分光光度法，284nm
溶出度：紫外分光光度法，242nm測定，吸收系數(shù)大，靈敏度更高
2.含量測定：紫外分光光度法，284nm
(二)注射液
1.有關(guān)物質(zhì)：HPLC，主成分自身對(duì)照法
2.含量測定：地西泮注射液處方中苯甲酸、苯甲酸鈉等附加劑有干擾，用HPLC法。此法操作簡便、可消除干擾。
第一節(jié) 異煙肼的分析
本類藥物母核吡啶環(huán)上的氮原子為堿性氮原子，吡啶環(huán)γ位上被酰肼取代，酰肼基具有較強(qiáng)的還原性，并可與某些含羰基的試劑發(fā)生縮合反應(yīng)。
一、鑒別試驗(yàn)
1.制備衍生物測定熔點(diǎn)
酰肼基與芳醛縮合形成腙，析出結(jié)晶，可測定其熔點(diǎn)。最常用的芳醛為香草醛。
2.銀鏡反應(yīng) 取異煙肼約10mg，置試管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸銀試液1ml，即發(fā)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上生成銀鏡。
3.紅外光譜
二、異煙肼中游離肼的檢查
異煙肼是一種不穩(wěn)定的藥物，其中的游離肼是由制備時(shí)原料引入，或在貯存過程中降解而產(chǎn)生。而肼又是一種誘變劑和致癌物質(zhì)，因此國內(nèi)外藥典多數(shù)規(guī)定了異煙肼原料藥及其制劑中游離肼的限量檢查。中國藥典對(duì)異煙肼原料和注射用異煙肼中游離肼的檢查均采用薄層色譜法。
檢查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg(相當(dāng)于游離肼50μg)的溶液，作為對(duì)照溶液。吸取供試液10μl 與對(duì)照溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板(用羧甲基纖維素鈉溶液制備)上，以異丙醇-丙酮(3:2)為展開劑，展開后，晾干，噴以乙醇制對(duì)二甲氨基苯甲醛試液，15min后檢視，在供試品主斑點(diǎn)前方與硫酸肼斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點(diǎn)。
異煙肼斑點(diǎn)呈棕橙色的清晰斑點(diǎn)，Rf值約為0.21。游離肼斑點(diǎn)呈鮮黃色，Rf值約為0.3。本法檢出肼的靈敏度為0.1μg，檢出限量約為0.02%。
三、含量測定
異煙肼具有還原性，可用氧化還原滴定法測定含量。中國藥典采用溴酸鉀法，用甲基橙指示劑指示終點(diǎn);等當(dāng)點(diǎn)過后稍過量的溴酸鉀氧化甲基橙使其粉紅色消失。采用本法測定異煙肼片和注射劑的含量。
第二節(jié) 硝苯地平的分析
具有1,4-二氫吡啶母核。苯環(huán)上硝基取代，遇光不穩(wěn)定，易發(fā)生自身氧化還原反應(yīng)。
一、鑒別
1.與NaOH試液反應(yīng)：加20%NaOH溶液，振搖顯橙紅色
2.紫外分光光度法
3.紅外分光光度法
二、檢查
1.有關(guān)物質(zhì)：易發(fā)生光化學(xué)岐化反應(yīng)，降解為硝苯吡啶衍生物及亞硝苯吡啶衍生物。采用HPLC檢查，限量分別為0.2%，雜質(zhì)總量不得大于0.5%。檢查時(shí)避光操作。
2.一般雜質(zhì)
三、含量測定
硝苯地平具有還原性，可在酸性溶液中用鈰量法直接滴定，以鄰二氮菲為指示劑。
第三節(jié) 諾氟沙星及其制劑的分析
一、諾氟沙星的分析
(一)鑒別
1.薄層色譜：對(duì)照品對(duì)照
2.HPLC
(二)檢查
有關(guān)物質(zhì)：HPLC，自身稀釋對(duì)照
(三)含量測定
HPLC，外標(biāo)法計(jì)算。流動(dòng)相中加入適量三乙胺掃尾劑，可克服拖尾現(xiàn)象。
二、諾氟沙星制劑
1.軟膏和乳膏劑：紫外分光光度法，對(duì)照品比較法
軟膏基質(zhì)干擾測定，利用其溶于三氯甲烷，藥物有羧基溶于NaOH的性質(zhì)進(jìn)行處理。加三氯甲烷溶解供試品后，用NaOH溶液提取藥物進(jìn)行測定。
2.膠囊：紫外分光光度法檢查溶出度，HPLC測定含量
第四節(jié) 鹽酸氯丙嗪和奮乃靜的分析
分子結(jié)構(gòu)中具有共同的硫氮雜蒽母核，10位上的取代基，為具有2-3個(gè)碳鏈的二甲或二乙胺基，或?yàn)楹s環(huán)如哌嗪的衍生物等。具有紫外特征吸收，峰多在250nm～265nm。遇不同氧化劑例如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過氧化氫等，易被氧化呈色。
一、鑒別
(一)鹽酸氯丙嗪的鑒別
1.氧化反應(yīng)
吩噻嗪環(huán)可被不同氧化劑如硫酸、硝酸氧化而呈色。如加硝酸5滴顯紅色，漸變?yōu)辄S色。
2.紫外吸收光譜
氯丙嗪在254nm和306nm有吸收，在254nm吸收度約為0.46。
3.Cl-反應(yīng)
沉淀反應(yīng) 與硝酸銀生成白色沉淀，可溶于氨試液
氧化反應(yīng) 與二氧化錳硫酸反應(yīng)產(chǎn)生氯氣，使?jié)駶櫟矸鄣饣浽嚰堊兯{(lán)。
4.紅外光譜
(二)奮乃靜的鑒別
1.氧化反應(yīng) 被過氧化氫氧化呈深紅色
2紫外吸收光譜
奮乃靜在258nm8有吸收，吸收度約為0.65。
3.紅外光譜法
二、有關(guān)物質(zhì)檢查
(一)溶液澄清度和顏色
澄清度 控制游離氯丙嗪
顏色 控制氧化產(chǎn)物的量
(二)有關(guān)物質(zhì)
控制合成的原料氯吩噻嗪和間氯苯胺等。采用薄層色譜法自身稀釋對(duì)照法檢查。限量1.0%。
奮乃靜采用薄層色譜法自身稀釋對(duì)照法檢查，規(guī)定限量3.0%
三、鹽酸氯丙嗪及其制劑的含量測定
(一)鹽酸氯丙嗪
1.原料藥 非水溶液滴定法
側(cè)鏈脂氨基具有堿性。由于為鹽酸鹽，滴定前加入一定量的醋酸汞試液，使生成難離解的氯化汞，在進(jìn)行滴定
2.片劑 紫外分光光度法
在波長254nm測定吸收度，按吸收系數(shù)法測定標(biāo)示量百分含量。
3.注射劑 紫外分光光度法
維生素C在243nm有吸收，為防止抗氧劑維生素C干擾，在306nm波長處測定。
四、奮乃靜及其制劑的含量測定
1.原料藥 非水滴定法
2.片劑 紫外分光光度法，對(duì)照品比較法計(jì)算含量
3.注射劑 萃取后非水滴定法
由于溶劑水對(duì)測定有干擾，所以加氫氧化鈉試液堿化后，用氯仿提取藥物，揮干氯仿，照原料藥方法測定。
第五節(jié) 地西泮和奧沙西泮及其制劑的分析
二氮雜卓七元環(huán)上氮原子具有強(qiáng)的堿性，具有明顯紫外吸收。
一、鑒別
(一) 地西泮
1.硫酸-熒光反應(yīng) 藥物溶于硫酸后，在紫外光(365nm)下，呈現(xiàn)黃綠色熒光。
2. 紫外和紅外吸收光譜
3. 氯元素反應(yīng) 本藥物為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，生成氯化氫，以5%氫氧化鈉溶液吸收，加硝酸酸化，顯氯化物反應(yīng)。
(二) 奧沙西泮
1.水解后重氮化-偶合反應(yīng) 鹽酸酸性條件下，緩緩加熱煮沸，水解生成二苯甲酮衍生物，具有芳伯氨基。加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅沉淀。
2.紫外光譜和紅外光譜
二、有關(guān)物質(zhì)檢查
1.地西泮：在生產(chǎn)工藝過程或貯藏期間出現(xiàn)分解，產(chǎn)生2-甲氨基-5-氯二苯酮雜質(zhì)。用HPLC，不加校正因子的主成分自身對(duì)照法檢查雜質(zhì)。
2.奧沙西泮：薄層色譜，溶液自身稀釋對(duì)照法
三、含量測定
1.地西泮：二氮雜卓七元雜環(huán)上氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法測定其含量
2.奧沙西泮：紫外分光光度法
四、地西泮制劑分析
(一)片劑
1.檢查
有關(guān)物質(zhì)：薄層色譜，溶液自身稀釋對(duì)照法，限量0.5%
含量均勻度：紫外分光光度法，284nm
溶出度：紫外分光光度法，242nm測定，吸收系數(shù)大，靈敏度更高
2.含量測定：紫外分光光度法，284nm
(二)注射液
1.有關(guān)物質(zhì)：HPLC，主成分自身對(duì)照法
2.含量測定：地西泮注射液處方中苯甲酸、苯甲酸鈉等附加劑有干擾，用HPLC法。此法操作簡便、可消除干擾。